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转膜仪使用方法

转膜仪是用来转印蛋白的仪器。电泳转印为转移蛋白zui常用的方法,该技术有效、迅速,并且使得蛋白在凝胶中保持高分辨率。在凝胶中向印迹膜载体转印分离的蛋白质的过程,即是电泳转印法。因为此技术往膜上转印蛋白高效、快速和准确,并且能够使得蛋白在凝胶中保持高分辨率。因此在转移印迹技术中得到广泛的应用。


准备工作

1、准备对缓冲液进行转移,缓冲液的pH值.不要无故调整,如果仪器过热出错,那么可能选择了不适合的缓冲液。


2、通电以后,凝胶在转移缓冲液中平衡,平衡能够将电泳缓冲液中的盐和清洁剂从凝胶中除去。若不将盐去除,将对缓冲液产生很大的影响,并且使得仪器在转移过程中过热。除此以外,在缓冲液中,低浓度的凝胶(<12%的聚丙烯酰胺)会缩水。平衡调整凝胶在最终大小,,为电泳转移提供便利。凝胶的浓度决定了平衡所需时间。


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3、以凝胶为依据将适宜大小的膜剪裁出来,在缓冲液中通过4545度夹角缓慢滑入膜,并且浸泡15-30分钟,从而湿润完全,不然的话,那么会容易起对转移起到阻滞作用的气泡。应当使用镊子或者带手套来避免污染膜。


4、以凝胶为依据将适宜大小的膜剪裁出来,2张加厚型滤纸或4张厚滤纸或6张薄滤纸被需要,将滤纸在转移缓冲液中浸透完全。


5、若一次转膜多张,使用透析膜隔开。也应当完全浸透透析膜。


使用方法

1、本过程请带手套操作,从而避免污染膜。


2、将外盖和不锈钢电极板打开。


3、首先将预先没泡过的厚滤纸放置在铂金阳极板上。在移液管或玻璃棒滤纸表面滚动,对气泡进行驱赶,将空气排出。


4、放置预先浸泡过的转移膜,将空气排出。


5、放置预先浸泡过的厚滤纸,将空气排出。


6、放置平衡过的凝胶,排出空气。在膜的中间放置凝胶。


7、如果将多余1张全大小的膜同时转移,应当使用预先浸泡过的透析膜隔开,之后再继续2-5步。如果凝胶比较小,能够将它们挨着平铺在一起转膜。将所有空气排出。


8、将电极板小心的装上,将电极板装好,使啮合,然而滤纸堆不要弄。


9、将外盖安上,将电源插上,若是阴极到阳极,黑色插黑色,黑色插黑色,那么转膜正常。不要弄饭,不然的话,会毁坏不锈钢板。


10、将电打开。转移大的膜30-60分钟,转移小的膜15-30分钟


11、转膜结束,将电源开关关闭,将电源连接切断,将外盖和阴极板打开,将滤纸与透析膜去掉。


2019-10-10 17:23:36 浏览次数:169次