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转膜仪转膜技术分类

转膜仪是用来转印蛋白的仪器。电泳转印为转移蛋白zui常用的方法,该技术有效、迅速,并且使得蛋白在凝胶中保持高分辨率。在凝胶中向印迹膜载体转印分离的蛋白质的过程,即是电泳转印法。因为此技术往膜上转印蛋白高效、快速和准确,并且能够使得蛋白在凝胶中保持高分辨率。因此在转移印迹技术中得到广泛的应用。


分类

在转膜仪器制造商的网站上能够找到转膜流程的详细说明,按照系统存在差异而有所不同。然而每种方法的原理均一致。在电场中,SDS提供的带电荷的蛋白能够在凝胶中移动,由凝胶往膜上转移,将蛋白的“印迹”显示出来。早期的方法对于扩散有所依赖,如今标准方法即是在电场中进行印迹。


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转膜包括湿转和半干转。因为膜干燥,湿转湿转更不容易,特别建议大蛋白转膜使用。两种转膜方法,均是在凝胶旁边放置放置,在在滤纸中间夹着凝胶和膜,在固体载体之间夹着整个三明治结构,使得胶与膜之间保持紧密接触。


半干转

在半干转中,由滤纸、凝胶、滤纸组成三明治,将三明治浸入转膜缓冲液中,在正负电极之间直接放置,在转膜中,将凝胶和负极靠近,将膜和正极靠近,非常重要。半干转的转膜缓冲液中Tris和甘氨酸的比例不一定相同于湿转,48 mM Tris39mM甘氨酸、0.04%SDS、20%甲醇为标准配方,应当对仪器制造商的实验方案进行参考。


湿转

在湿转中,在海绵和滤纸之间紧紧地夹着在海绵和滤纸。(由下至上依次海绵、滤纸、凝胶、膜、滤纸、海绵),使气泡不会在凝胶与膜之间形成得以确保。在转膜缓冲液中浸泡这三明治结构,对其施加电场。负电荷蛋白移向正极,在膜上结合,并对其继续移动进行阻止。1tris甘氨酸缓冲液为湿转的标准缓冲液与跑胶缓冲液所使用的缓冲液,然而SDS却没有,并且将甲醇加入至终浓度20%,建议在转膜缓冲液中相对于分子量大于100kd的蛋白来说将终浓度为0.1%的SDS加入。


2019-10-10 17:17:23 浏览次数:115次
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