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中国仪器网 中国仪器网 发言人杨宇军称 HPLC分析和纯化

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HPLC分析和纯化

使用柱子和泵系统来对HPLC进行分析,能够对高压经受传递,如此填料能够采用极细的微粒(3-10μm),所以需要在几分钟以内对多肽进行高度的分析。


HPLC分类

HPLC包括离子交换和反相两类。


和正常层析相比,反相HPLC条件恰恰相反。通过疏水作用,多肽在柱上连接,洗脱采用将离子强度降低的方式,例如将洗脱剂的疏水性增加。一般由共价吸附到硅上的碳氢烷链构成柱子这种链为G4-G8碳原子那么长。因为洗脱是一种疏水作用,所以用短链柱对大的疏水肽进行洗脱比较好。但是,在具体的实验中,这两类柱互变的区别不是非常的显著。由碳水化合物构成如苯基的别类载体。


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离子交换HPLC是以多肽和固相间的直接电荷相互作用为依靠。在一定PH范围,一种离子体由柱子带有的特定电荷衍变而成,但是相反电荷由多肽或多肽混合物的氨基酸组成表现出来。一种电荷相互作用叫做分离,洗脱出多肽方法为改变离子强度或者PH或者将两者均改变。一般,低离子强度的溶液首先使用,再将离子强度一步一步加强,直到从柱中洗脱出多肽。使用强阳离子交换柱为离子交换分离的一个例子。


一般80%acetonitrile0.1%TFA--H2o稀acetonitrile和0.1%TFA-H2O这两种缓冲剂组成典型的操作。以每分钟0.5%到1.0%改变的速度用线型梯变进行混合。如果用径向填柱,那么大小是25×250mm(10μm)和(10μm).8×100(3-10μm),如果为常见分析和纯化用柱,那么大小为4.6×250mm(3-10μm)和22×250mm。


有许多不同的试剂包含在各种缓冲剂中,值得一提的是在高pH或者微碱pH下能长时间暴露硅反相柱料,否则会对柱子产生破坏。


2019-07-25 17:57:28 浏览次数:94次

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